PCR实验方法步骤

在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      

10×PCRbuffer                    

5μl    dNTPmix（2mM）              

4μl    引物1（10pM）                  

2μl    引物2（10pM）                  

2μl    Taq酶（2U/μl）                

1μl    DNA模板（50ng-1μg/μl）   

1μl     加ddH2O至50μl   

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃40s→58℃30s→72℃60s，循环30-35次，最后在72℃保温7min。

结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

END